HPLC instrumento agua
metanol
Acetonitrilo
isopropanol
Cloruro de metileno
Hexano
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regenerar una columna
1
Separa la columna sucia y revertir su posición , de modo que la fase móvil está entrando en lo que es normalmente la salida de la columna. Adjuntar una línea de salida al otro extremo de la columna (el extremo que fue originalmente la entrada ) , y ejecutar esto en un contenedor de residuos .
2 Bomba
a través de una serie de disolventes con el fin de disminuir la polaridad . Una serie básica recomendada es comenzar con metanol , a continuación, progresar a través de acetonitrilo , acetonitrilo /isopropanol ( 75:25 ) , isopropanol , cloruro de metileno y hexano . Si la fase móvil originalmente se sienta en la columna era un tampón, un lavado con agua debe preceder el metanol . Una velocidad de flujo de 1 a 2 mililitros por minuto es típicamente adecuado, y aproximadamente 10 volúmenes de columna de cada disolvente debe ser bombeado a través . El volumen de la columna es el espacio interior no ocupado por el embalaje y se calcula como ( 0,7 x pi x ( ID /2 ) ^ 2 x L ) , donde ID es el diámetro y L interno de la columna es de su longitud .
3
Bomba de otros 10 volúmenes de columna de isopropanol a través de la columna para prepararlo para su uso con la fase móvil inicial . Si se tamponó la fase móvil original, también bombear agua a través de la columna después de la isopropanol antes de volver a la fase móvil original con búfer .
4
Desconectar la columna y hacia atrás y vuelva a conectar de forma que se encuentra en su configuración normal ( es decir, con la fase móvil se bombea en la entrada de la columna ) . Vuelva a conectar la salida de la columna al detector.