Las células se cultivaron en suspensión en medio de cultivo o unido a los platos de Petri o frascos de plástico. Como las células crecen se vuelven más densa , utilizar los nutrientes y productos de desecho excretan en el medio . Por lo tanto , las células deben ser divididos regularmente en números más pequeños y se les dio medio fresco - . Por lo general a un número específico de células por plato
Método
conde
y diluyen células suspendidas en medio fresco . Para células unidas , quite medio gastado y lavar suavemente las células con un tampón salino. Exponer las células a una solución de la enzima o la sal para romper célula-célula y célula - conexiones plato - tripsina es más comúnmente utilizado . Detener la reacción enzimática con la adición de suero animal , mezcla de células a cabo en un tubo y hacen girar en una centrífuga . Retire las células líquidos, suavemente resuspender en medio fresco , contar y dispersarlos a la densidad requerida.
Consideraciones
células Subcultura
en un ambiente estéril con material estéril para evitar la contaminación bacteriana o fúngica . La densidad celular , la cantidad de tiempo en la tripsina y la frecuencia de subcultivo son todas dependientes del tipo de célula . Utilice un microscopio para monitorear regularmente las células .