Técnicos Humanos preparar una suspensión de células con 20 millones de células por ml en 0,1 por ciento de suero fetal bovino (FBS ) y solución salina tamponada con fosfato ( PBS ) . Añaden CFSE y dejar reposar la suspensión durante ocho minutos , de acuerdo con la Universidad de Kansas Medical Center. A continuación se añade FBS al pre -calentado y las células se incuban en un baño de agua a 98,6 grados Fahrenheit durante 10 minutos . Después las células se centrifugaron durante cinco minutos , el sobrenadante se desecha y las células se lavan en una solución de 2 por ciento de FBS /PBS tres veces . Las células se fijaron con paraformaldehído .
Simplificados CFSE tinción Protocolo
Técnicos centrifugar las muestras de sangre , eliminando los glóbulos rojos . Más tarde , se lavan los linfocitos con PBS para eliminar la proteína libre . Para ser capaz de observar la división celular después de dos días , se añade CFSE en bajas concentraciones durante ocho minutos, a continuación, la reacción se bloqueó con suero de ternera fetal . Las células se lavaron dos veces con PBS /FCS . Este protocolo se puede utilizar en " in vivo " o "in vitro " experimentos , de acuerdo con The Lab Hedrick de la Universidad de California.
Protocolo para la activación de las células T CD8 ingenuo en Vitro
células T naive es un linfocito que ha diferenciado en la médula ósea . Este tipo de células se considera maduro , y las células responden a nuevos agentes patógenos que el sistema inmune nunca se ha encontrado . Los técnicos incuban virus de la influenza y las muestras de células en hielo durante 30 minutos , centrifugar y continuar el proceso de incubación durante 18 horas a 98,6 grados Fahrenheit . Posteriormente , las células se tiñeron con CFSE y los resultados se analizaron bajo citometría de flujo.